Dữ liệu Chuẩn hóa trong Giám sát Vi sinh Liên tục

Vấn đề thảo luận:

Tôi có nên quan tâm đến việc chuẩn hóa dữ liệu cho khu vực cấp độ A và B không?

Bối cảnh:

Theo các hướng dẫn hiện hành về sản xuất trong phòng sạch, đơn vị đo lường tiêu chuẩn để định lượng kết quả lấy mẫu không khí chủ động là Đơn vị Hình thành Khuẩn lạc trên mét khối (CFU/m³).

Trong môi trường phòng sạch cấp độ A, EU GMP Tập 4 Phụ lục 1 (Bản sửa đổi 2022) yêu cầu giám sát không khí vi sinh chủ động liên tục trong suốt thời gian thực hiện các hoạt động quan trọng, bao gồm cả giai đoạn lắp ráp/thiết lập thiết bị. Cách tiếp cận tương tự cũng nên được xem xét cho môi trường cấp độ B:

"9.24 Giám sát không khí vi sinh liên tục ở cấp độ A (ví dụ: lấy mẫu không khí hoặc đĩa lắng) phải được thực hiện trong toàn bộ thời gian xử lý quan trọng, bao gồm lắp ráp thiết bị (thiết lập vô trùng) và xử lý quan trọng. Cách tiếp cận tương tự nên được xem xét cho phòng sạch cấp độ B dựa trên rủi ro tác động đến quá trình xử lý vô trùng." (Tham khảo: EU GMP Phụ lục 1, 2022)

Do đó, thể tích không khí được lấy mẫu trong các khu vực này (liên quan chặt chẽ đến thời gian và lưu lượng) có thể vượt quá một mét khối trong khoảng thời gian giám sát.

Đối với giám sát không khí (cả vi sinh và đếm hạt tổng), khi thời gian của quy trình sản xuất vượt quá thời gian cần thiết để lấy mẫu 1 m³ không khí, không khuyến nghị chuẩn hóa kết quả về 1 m³. Cụ thể, đối với lấy mẫu không khí vi sinh chủ động, cần xem xét ba yếu tố sau:

1. Chất gây ô nhiễm không phân bố đồng đều theo thời gian hoặc không gian

Kết quả giám sát môi trường cung cấp bức tranh tức thời về điều kiện tại một thời điểm cụ thể và không phải là dữ liệu có thể lặp lại. Các yếu tố như luồng không khí, di chuyển của nhân viên, việc mở cửa, hoạt động sản xuất và nhiễu loạn cục bộ có thể gây ra các đỉnh ô nhiễm tạm thời.

Do đó, việc chuẩn hóa dữ liệu toán học về 1 m³ không phản ánh chính xác rủi ro vi sinh trong giai đoạn lấy mẫu.

2. Đơn vị Hình thành Khuẩn lạc (CFU) là các đơn vị riêng biệt, không thể phân chia

Chuẩn hóa kết quả về 1 m³ có thể dẫn đến các số không nguyên, điều này không nhất quán về mặt vi sinh và kỹ thuật vì vi sinh vật là các đơn vị nguyên (tham khảo điểm 3).

3. Trong môi trường cấp độ A (quan trọng nhất từ góc độ sản phẩm), giới hạn mong đợi là "không có sự phát triển"

Trong môi trường cấp độ A, mục tiêu không phải là 0 CFU/m³ mà là xác nhận không có sự phát triển (no growth). Điểm quan trọng là theo dõi xem có sự phát triển hay không; không phải có bao nhiêu khuẩn lạc trong 1 m³.

Theo Phụ lục 1 (Bảng 6, đoạn 9.30), tiêu chí là không phát hiện khuẩn lạc:

c) Cần lưu ý rằng đối với cấp độ A, bất kỳ sự phát triển nào cũng phải dẫn đến điều tra.

Phương pháp Khuyến nghị

Thay vì chuẩn hóa kết quả về 1 m³, hãy báo cáo số lượng CFU tuyệt đối được phát hiện cùng với thể tích đã lấy mẫu. Điều này giúp đưa kết quả vào bối cảnh và xem xét thời gian lấy mẫu và lưu lượng đã sử dụng. Điều này nên đi kèm với ghi chú diễn giải để hỗ trợ đánh giá định tính về sự tuân thủ, vì sự tuân thủ định lượng có thể không áp dụng được trong các bối cảnh như vậy.

LƯU Ý: Làm tròn lên số nguyên gần nhất vì vi sinh vật (sự hiện diện sống) không thể được phân chia, đặc biệt khi đánh giá tác động tiềm ẩn đến chất lượng sản phẩm.

Ví dụ: Các ví dụ sau trong cấp độ A và cấp độ B thể hiện lấy mẫu liên tục thường quy trong 4 giờ (240 phút) ở 25 LPM:

Cấp độ A

• Lưu lượng: 25 L/phút
• Thời gian: 4 giờ (240 phút)
• 1000 Lít (L) = 1 m³ (hệ số chuyển đổi từ L sang m³ = 1000)
• Thể tích lấy mẫu = (25 L/phút x 240 phút) / 1000 = 6 m³
• Kết quả: 2 CFU trên đĩa sau khi ủ

Cách tiếp cận khuyến nghị cho diễn giải dữ liệu: 2 CFU trong 6 m³

Đánh giá Định tính: cần điều tra

Điều tra Chất lượng:

• Định danh vi sinh là bắt buộc
• Tính toán: 0,3 CFU/m³ (2 CFU/6 m³) ≅ 1 CFU/m³ (có phát triển)
• → VƯỢT GIỚI HẠN HÀNH ĐỘNG = SAI LỆCH (= điều tra quy trình để đánh giá tác động lô)

Cấp độ B

Trước tiên, đối với khu vực cấp độ B, quan trọng là đánh giá rủi ro tác động đến quá trình xử lý vô trùng trước khi thực hiện giám sát liên tục.

Trong khu vực cấp độ B, giám sát liên tục không bắt buộc; có các lựa chọn khác như lấy mẫu 1 m³ (ví dụ: 40 phút ở 25 LPM) với tần suất lấy mẫu theo lịch trình và liên quan đến quy trình có thể đủ để bao phủ rủi ro.

• Lưu lượng: 25 L/phút
• Thời gian: 4 giờ (240 phút)
• Thể tích lấy mẫu = 6 m³
• Kết quả: 11 CFU trên đĩa sau khi ủ

Cách tiếp cận khuyến nghị: 11 CFU trong 6 m³

Đánh giá Định tính: cần điều tra

Điều tra Chất lượng:

• Định danh vi sinh là bắt buộc
• Tính toán: 1,8 CFU/m³ ≅ 2 CFU/m³ (thấp hơn 10 CFU/m³)
• → TRONG GIỚI HẠN CẢNH BÁO, sai lệch không bắt buộc ở giai đoạn này nhưng điều tra quy trình được khuyến nghị cao

Quy trình điều tra bắt buộc khi phát hiện vi sinh trong cấp độ A và B. Mọi phát hiện đều phải được định danh và đánh giá tác động.

Vi sinh không phân bố đồng đều trong không gian và thời gian. Các "điểm nóng" ô nhiễm có thể xuất hiện do luồng khí, hoạt động của nhân viên, hoặc nhiễu loạn cục bộ.

Minh họa vấn đề của việc chuẩn hóa: 2 CFU trong 6 m³ = 0.33 CFU/m³ (làm tròn thành 1 CFU/m³). Điều quan trọng là có hay không có phát triển, không phải số lượng trên m³.

Kết luận (Quan điểm PMS)

• - Sự phân bố không đồng nhất của vi sinh vật trong không gian và theo thời gian đặt ra nghi vấn về việc sử dụng độc quyền dữ liệu chuẩn hóa (CFU/m³), đặc biệt trong môi trường cấp độ A.
• - Đối với môi trường cấp độ B, khuyến nghị đánh giá rủi ro về tác động tiềm ẩn đến quá trình xử lý vô trùng.
• - Kết quả chuẩn hóa (CFU/m³) có thể hữu ích cho phân tích xu hướng hoặc điều tra nhưng thiếu ý nghĩa vi sinh học cho giám sát thường quy - định danh vi sinh luôn cần thiết.
• - Cách tiếp cận vững chắc và toàn diện nhất là báo cáo cả số lượng CFU tuyệt đối và giá trị chuẩn hóa, kèm theo đánh giá kỹ thuật giải thích ý nghĩa sinh học và hàm ý quy định của chúng.
• - Phân tích xu hướng được khuyến nghị cao vì nó giúp ngăn ngừa các sự kiện mất kiểm soát có thể ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm.
• - Điều quan trọng là phải có kiến thức và hiểu biết sâu sắc về các quy trình, thiết lập kế hoạch bảo trì phòng ngừa hiệu quả, thực hiện kế hoạch giám sát phù hợp và đảm bảo xem xét định kỳ tình hình tổng thể.

Tài liệu được biên soạn bởi các chuyên gia tư vấn của Particle Measuring Systems với kinh nghiệm sâu rộng trong ngành dược phẩm về đảm bảo vô trùng và giám sát môi trường.